Standard curve 그리기

여러가지의 이유로 어쩌다보니 랩실에서 12주간 생활하게 된 T씨... 일하기 위해 정리해봤다.

12.19 작성
<샘플에서 단백질 정량을 위한 STD curve 그리기>

Q. 왜 STD curve를 그리는가? STD curve 목적은 sample 안의 target 물질을 정량하기 위해 표준물질의 알고있는 양으로 측정한 값입니다.

1. 8개의 tube를 준비하고 DW(생리식염수)를 400ml씩 담는다.
2. 8번 tube에는 DW396ml와 BSA 4ml 추가한다.

Why? 나중에 마이크로 플레이트에 400ml를 담아야하는데 400ml만 하면 7번으로 옮겨담은 후 용액이 모자라기 때문
Why 200/1로 희석? 후에 나는 세포에서 단백질을 추출할 것인데 농도가 이 range 안에서 나오기 때문. 더 높은 농도로 할 수 있지만 BSA을 낭비할 필요가 없다.

3. 400ml 파이펫팅하여 7번 tube로 옮긴다. 볼텍스로 돌리고 또 400ml 파이펫팅하여 6번 tube로 옮기고 볼텍스 돌리고... 이렇게 2번 tube까지 반복한다.
4. 3번을 끝내면 마지막에 2번 tube에는 총 800ml의 용액이 존재한다. 400ml를 따서 버려 나머지 tube와 부피를 맞춘다.
5. Protein assay Dye 시약을 모든 tube에 100ml씩 넣는다.

Q. 색이 어떻게 나와야 좋은가? BSA 농도가 짙을수록 파란색이 강하게 나온다. 즉 8번 tube로 갈수록 파란색이 짙게 나와야한다.

6. 잘 섞고(볼텍스) 마이크로 플레이트에 200ml씩 두줄을 옮겨담는다.

Q. 마이크로 플레이트는 무엇인가? 흡광도 측정하는 마이크로 플레이트 리더에 넣는 판.

7. 리더기에 넣고 흡광도를 측정한다. 그러면 아래와 같은 엑셀을 얻을 수 있다.

! 이때 뚜껑은 벗기고 넣는거다.. 덮고 넣었다가 혼났다.

8. 두 값의 평균을 계산하고 꺾은선 그래프를 생성한다.
9. 추세선을 그리고 R값을 확인한다. R이 1에 가까울수록 성공적이다.

총 3세트를 시행했고 마지막 세트가 0.9941로 좀 허접하지만.. 그래도 앞의 두 세트는 0.997대로 잘 나왔으니 성공적!

무사히 1일차를 넘겼다.